描述

SuperScript® III 反转录酶 (RT) (SuperScript® III Reverse Transcriptase (RT)) 是 SuperScript® II RT 的专有突变体，在 50°C 具有活性，半衰期为 220 分钟，使用基因特异性引物 (GSP) 提高特异性，在所有 RT 中 cDNA 产量zui高。 如果要进行特定基因的 RT-PCR 或从总 RNA 或 poly (A)+ RNA 样品生成 cDNA，该产品十分理想。 和 SuperScript® II 一样，它可以从单链 RNA、DNA 或 RNA:DNA 杂合体合成互补 DNA 链。 通过引入点突变对 SuperScript® III RT 进行遗传改造，这些点突变可以增加半衰期、降低 RNase 活性并增加热稳定性。 进行结构修饰后：

50°C 时半衰期为 220 分钟，获得zui高的 cDNA 产量（图 1）

RNase H 活性降低，获得更多全长 cDNA

在 50°C 有zui大活性，用 GSP 增加特异性

能增加 RT 单位而不抑制后续的 PCR

 

应用： *链 cDNA 合成、阵列标记、cDNA 文库、RT-PCR、引物延伸和 3´ 和 5´ RACE。

 

来源： 纯化自表达 M-MLV 的 pol 基因的大肠杆菌 (1,2)，通过突变增加了热稳定性和半衰期，降低了 RNase H 活性。

 

性能和质量测试： SDS-PAGE 纯度；脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶分析（图 2）及 cDNA 产物的产量和长度。

 

单位定义：一个单位的 SuperScript® III RT 是在 37°C 的反应体系中，使用 poly(A)?oligo(dT)12-18 作为模板?引物，在 10 分钟内将 1 纳摩尔脱氧核糖核苷酸掺入酸沉淀材料所需的酶量 (3)。

 

单位反应条件： 50 mM Tris-HCl (pH 8.3)、40 mM KCl、6 mM MgCl 2、1 mM DTT。 0.5